Šta je PCR analiza?
Polimerazna lančana reakcija (PCR) analiza je laboratorijska tehnika dizajnirana da identifikuje male količine DNK u uzorku procesom poznatom kao amplifikacija . Prilikom amplifikacije PCR-a, DNK interesa se kopira više puta sve dok ne postoji dovoljno za analizu i otkrivanje. Na primjer, PCR se može koristiti za identifikaciju malih količina DNK iz organizama koji uzrokuju gonoreju ili klamidiju koji su prisutni u uzorku urina .
Kako funkcioniše PCR?
Prvi korak u PCR-u je zagrijavanje uzorka tako da se dvostruka DNK razdvaja na dvije pojedinačne žice - to se naziva denaturacija . Zatim se prajmeri , kratki uzorci DNK koji se podudaraju sa krajevima DNK sekvence interesa, kombinuju sa uzorkom DNK. Posle toga, DNK polimeraza se koristi za pokretanje replikacije DNK na lokaciji prajmera. Na kraju, DNK se zagreva da ponovo razdvoji žice, a čitav PCR proces počinje ponovo.
Količina DNK segmenta koji je prisutan u uzorku povećava se eksponencijalno sa svakim PCR ciklusom: jedna kopija postaje dva, zatim postaje četiri, tada postaje osam, itd. tako da je generalno potrebno samo 20 do 40 ciklusa da bi se utvrdilo da li je DNK u pitanju prisutna (i, ako jeste, da obezbedi dovoljan uzorak za analizu).
Svi koraci polimerazne lančane reakcije - denaturiranje DNK, primena prajmera i izduženje DNK - se dešavaju na različitim temperaturama, tako da se posle početne mešavine spojiti, koraci se mogu kontrolisati procesom poznatom kao termocikliranje , u kojoj se temperatura održava na potrebnim nivoima dovoljno dugo za svaki korak.
Prema tome, PCR je efikasan način amplifikacije količine ciljane DNK u jednoj epruveti sa malo potrebe za ljudskom intervencijom.
Polimerazna lančana reakcija predstavlja revoluciju u biološkoj tehniku kada je prvi put razvijena početkom osamdesetih godina, a kreator PCR-a Kary Mullis dobio je Nobelovu nagradu za hemiju za svoj rad 1993. godine.
Zašto je PCR relevantan za STD testiranje?
Lančana reakcija polimeraze i srodne tehnike poput ligazne lančane reakcije pokazuju da su sve značajnije za STD testiranje. Ovo je zato što ove tehnike mogu direktno identifikovati male količine viralne DNK ili RNK u uzorcima. Identifikacija genetskog koda patogena ne zahteva da je patogen živ, kao što je bakterijska kultura ili virusna kultura . Takođe ne zahtijeva da se infekcija desila dovoljno vremena prije nego što su ljudi razvili detektibilnu reakciju antitela (kao što je otkriveno od strane ELISA .) To znači da PCR tehnike mogu ponekad otkriti bolesti ranije od drugih testova i bez koliko je potrebno biti zabrinut za održavanje uzoraka živog ili testiranje u pravom trenutku.